Hvordan lage fosfatbuffert saltvann (PBS)

PBS (fosfatbuffet saltvann) er en vanlig brukt buffer for immunhistokjemisk farging og brukes ofte i biologisk forskning. Osmolaritet og ionkonsentrasjonen av løsningene stemmer overens med menneskets kropp (isotonisk).

PBS er en vannbasert saltløsning som inneholder natriumhydrogenfosfat, natriumklorid og i noen tilfeller kaliumklorid og kaliumdihydrogenfosfat.

Immunfluorescensfarvning for IHC

Immunfluorescerende farging var den første immunhistokjemiske (IHC) fargemetoden. Med fundamentaliteten av antigen-antistoff bindingsreaksjon, blir antigener synlige ved bruk av fluorescensfarger når de er konjugert med antistoffer. Prosessen skjer når den aktiveres av spennende lys av en bestemt bølgelengde under et fluorescerende mikroskop. Immunohistokjemi refererer til prosessen med å detektere antigener (f.eks. Proteiner) i cellene i en vevseksjon ved å bruke prinsippet om antistoffer som binder spesifikt til antigener i biologiske vev.

Bruk av fosfatbuffert saltvann (PBS)

Fosfatbuffert saltvann har mange bruksområder fordi det er isotonisk og ikke-giftig for de fleste celler. Det kan brukes til å fortynne stoffer og brukes til å skylle containere som inneholder celler. PBS kan brukes som fortynningsmiddel i metoder for tørking av biomolekyler fordi vannmolekyler i det vil bli strukturert rundt stoffet (for eksempel protein) for å bli "tørket" og immobilisert til en fast overflate.

Den tynne filmen av vann som binder seg til stoffet, forhindrer denaturering eller andre konformasjonsendringer. Karbonatbuffere kan brukes til samme formål, men med mindre effektivitet. PBS kan også brukes til å ta et referansespekter ved måling av proteinadsorpsjonen i ellipsometri.

Fremstilling av PBS

Det er mange forskjellige måter å forberede PBS på.

Noen formler inneholder ikke kalium, mens andre inneholder kalsium eller magnesium. Buffertoppskriften under, som er relativt enkel, er for 10X PBS stamløsning (0. 1M). Et alternativ til å legge til Tween er også gitt. Hele prosessen tar omtrent 10 minutter.

Hvordan lage fosfatbuffert saltvann (PBS)

1. Vekt følgende: 10. 9g vannfri natriumfosfatdibasisk (Na2HPO4), 3. 2g vannfritt natriumfosfat monobasisk (NaH2PO4) og 90g natriumklorid (NaCl).
2. Oppløs alt ovenfor i under 1 liter destillert vann.
3. Juster pH til 7. 4.
4. Lag oppløsningen til et sluttvolum på 1L.
5. (valgfritt) For en oppløsning inneholdende 0,5% Tween 20, tilsett 5 ml Tween 20 til 1L-oppløsningen.
6. Fortynn 10X før bruk og juster pH om nødvendig.

Tips for å lage PBS Buffer

• Lagre ved romtemperatur.
• Ikke-vannfrie reagenser kan bli erstattet, men du må omberegne riktig masse av hver for å imøtekomme de tilsatte vannmolekylene.

Hva du trenger å lage PBS-buffer

• Natriumfosfat, monobasisk (vannfri)
• Natriumfosfatdibasisk (vannfri)
• Natriumklorid
• Skala og veiebåter
• Magnetisk omrører og rørstang > pH-probe, kalibrert og passende løsninger for justering av pH
• 1L volumetrisk kolbe
• Tween 20 (valgfritt)