Slik lager du en TAE-buffer i noen få trinn

TAE buffer er en løsning bestående av Tris base, eddiksyre og EDTA (Tris-acetat-EDTA). Det er historisk den vanligste bufferen som brukes til agarosegelelektroforese i analysene av DNA-produkter som resulterer fra PCR-amplifikasjon, DNA-renseprotokoller eller DNA-kloningsforsøk.

Denne bufferen har en lav ionstyrke og lav bufferingskapasitet. Den passer best til elektroforese av store (> 20 kb) biter av DNA og må byttes ofte eller resirkuleres i lengre (> 4 h) gel-runetider.

Med det i tankene, vil du kanskje vurdere flere batcher av bufferen.

Gitt at bufferen er enkel å lage og trinnene kan utføres raskt, bør det være spesielt tidkrevende eller vanskelig å trekke ut mer enn ett parti om gangen. Ved å bruke instruksjonene nedenfor, bør det ta bare 30 minutter å lage TAE-bufferen. Slik gjør du:

Klargjør en lagerløsning av EDTA

En EDTA (etylendiamintetraeddiksyre) oppløsning fremstilles på forhånd. EDTA vil ikke gå helt inn i en løsning inntil pH er justert til ca. 8. 0. For en 500 milliliter stamopløsning på 0,5 M EDTA veier 93. 05 gram EDTA dinatriumsalt (FW = 372. 2 ). Oppløs i 400 ml deionisert vann og juster pH med natriumhydroksyd (NaOH). Løs opp løsningen til et sluttvolum på 500 ml.

Pisk opp en lagerløsning av TAE

Lag en konsentrert (50x) stamløsning av TAE ved å veie ut 242 gram Tris base (FW = 121. 14) og oppløs den i ca 750 milliliter avionisert vann.

Legg forsiktig 57. 1 ml istsyre og 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8 0). Deretter justerer du løsningen til et sluttvolum på 1 liter. Denne stamopløsningen kan lagres ved romtemperatur. PH på denne bufferen er ikke justert og bør være ca 8. 5.

Klargjør en arbeidsløsning av TAE

Arbeidsløsningen av 1x TAE buffer fremstilles ved å fortynne stamløsningen med 50x i deionisert vann.

Konvensjonelle sluttkoncentrasjoner er 40 mM. Tris-acetat og 1 mM EDTA. Bufferen er nå klar til bruk i å kjøre en agarosegel.

Hva du trenger for bufferen

Siden du krever TAE-bufferen, trenger du bare et raskt og enkelt sett med instruksjoner, det er ikke mye materiale som trengs for det. Du trenger bare EDTA dinatriumsalt, Tris base og iseddik.

For å lage buffer krever det også en pH-måler og kalibreringsstandarder, etter behov. Du trenger også 600 milliliter og 1500 milliliter bønner eller kolber samt graduerte sylindere. Til slutt trenger du deionisert vann, rørstenger og rørplater.

Innpakning

Hvor har du tenkt å lage bufferen - på et skoleside, et arbeidssted eller et annet sted, for eksempel ditt hjem?Kontroller beholdningen før du begynner å forsikre deg om at du har alle ovenstående materialer til TAE-bufferen.

Hvis du heller ikke trenger å betale for materialer, anbefales det å velge å lage bufferen utenfor ditt hjem. Du kan enkelt bestille materialene du trenger på nettet eller besøke en spesialforretning for dem.