Hvordan lage TBE-buffer i 3 enkle trinn

TBE buffer er en bufferløsning bestående av Tris base, borsyre og EDTA (eller Tris-borat-EDTA helt). Denne bufferen benyttes ofte for agarosegelelektroforese i analysen av DNA-produkter som resulterer fra PCR-amplifikasjon, DNA-renseprotokoller eller DNA-kloningseksperimenter.

TBE buffer er spesielt nyttig for separasjon av mindre DNA-fragmenter (MW <1000), slik som små produkter med restriktionsenzym fordøyelser.

TBE har større bufferingskapasitet og gir skarpere oppløsning enn TAE-buffer. TAE buffer er en løsning bestående av Tris base, eddiksyre og EDTA (Tris-acetat-EDTA).

TBE er generelt dyrere enn TAE og hemmer DNA-ligase, noe som kan forårsake problemer hvis påfølgende DNA-rensing og ligeringstrinn er ment. Med de tre enkle trinnene som følger, lær hvordan du lager TBE-buffer. Det bør ikke ta mer enn 30 minutter å lage denne bufferen. Slik gjør du:

Klargjør en lagerløsning av EDTA

En EDTA (etylendiamintetraeddiksyre) løsning bør fremstilles på forhånd. EDTA vil ikke gå helt opp i løsningen til pH er justert til ca. 8. 0. For en 500 milliliter stamopløsning på 0,5 M EDTA veier 93. 05 gram EDTA dinatriumsalt (FW = 372. 2). Deretter oppløses det i 400 ml deionisert vann og justerer pH med NaOH. Etterpå fyller du opp løsningen til et sluttvolum på 500 ml.

Lag en konsentrert (5x) stamopløsning av TBE ved å veie 54 g Tris base (FW = 121. 14) og 27. 5 g borsyre (FW) = 61, 83) og oppløses begge i ca. 900 ml deionisert vann. Deretter tilsettes 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) og juster løsningen til et sluttvolum på 1 liter.

Denne oppløsningen kan lagres ved romtemperatur, men et utfelling vil dannes i eldre løsninger. Oppbevar bufferen i glassflasker og kast om det har dannet et bunnfall.

Forbered en arbeidsløsning av TBE

For agarosegelelektroforese kan en TBE-buffer brukes i en konsentrasjon på 0. 5x (1: 10 fortynning av konsentrert lager). Fortynn oppløsningen med 10x i deionisert vann. Endelige oppløsningskonsentrasjoner er 45 mM Tris-borat og 1 mM EDTA. Bufferen er nå klar til bruk i å kjøre en agarosegel.

Hva du trenger

For å lage TBE-buffer, trenger du bare fire stoffer. De gjenværende elementene på denne listen er utstyr. De fire nødvendige stoffene er EDTA dinatriumsalt, Tris base, borsyre og deionisert vann.

Når det gjelder utstyr, trenger du en pH-måler og kalibreringsstandarder, etter behov. I tillegg til det, trenger du 600 milliliter og 1500 milliliter beger eller kolber. Avrunding av utstyrets behov er uteksaminerte sylindere og rørstenger og rørplater.

Kontroller beholdningen på laboratoriet du skal bruke for å sikre at du har alt du trenger før du kommer i gang. Ingenting er verre enn å måtte stoppe i midten av å lage en løsning fordi du har gått tom for de riktige materialene.

Hvis ditt laboratorium er på skolen eller på arbeidsstedet ditt, må du sjekke med riktig personell for å se at de har alle elementene på lageret. Å gjøre det kan spare deg tid og energi til slutt.