RFLP: Definisjon og bruken av disse til å løse DNA-mysterier

Begrensningsfragmentlengdepolymorfisme (RFLP) er en molekylær metode for genetisk analyse som gjør at enkeltpersoner kan identifiseres basert på unike mønstre av restriktionsenzymskjæring i bestemte DNA-regioner.

Også referert til som RFLP-analyse, utnytter teknikken polymorfismene i de enkelte folks genetiske koder. Selv om alle medlemmer av en art har i det vesentlige samme genetiske sminke, representerer disse små forskjellene variasjoner i fenotype, som utseende eller metabolisme, mellom individer.

RFLP-analyseteknikk innebærer kutting av en bestemt region av DNA med kjent variabilitet, med restriksjonsenzymer, deretter separering av DNA-fragmentene med agarosegelelektroforese og bestemmelse av antall fragmenter og relative størrelser.

Et restriksjonsenzym er et enzym, et proteinmolekyl, som kutter DNA ved restriksjonsseter. I essens blir DNA-prøven oppdelt og fordøyd av restriksjonsenzymer. De resulterende fragmentene separeres i henhold til deres lengder, og mønsteret av fragmentstørrelser vil variere for hver enkelt testet.

Den fullstendige RFLP-prosessen krever sondemerking, DNA-fragmentering, elektroforese, blotting, hybridisering, vasking og autoradiografi. Den detekterte RFLP visualiseres ved hjelp av røntgenfilm i en autoradiografi hvor DNA-fragmenter kan sees og analyseres etter at de er separert fra hverandre ved elektroforese.

Noen av søknadene for RFLP-analyse inkluderer:

DNA fingeravtrykk

• Rettsmedisinske forskere kan bruke RFLP-analyse for å identifisere mistanker basert på bevisprøver samlet på forbrytelsesscener. Paternity. RFLP brukes også til å bestemme faderskap eller for å oppdage forfedre.
• Genetisk mangfold. Teknikken kan brukes til å studere evolusjon og migrasjon av dyreliv, studere avlsmønstre i dyrepopulasjoner og i påvisning og diagnostisering av visse sykdommer.
• Teknikken til å bruke RFLP-deteksjon av variasjon i genomene er et viktig verktøy i genomkartlegging og genetisk sykdomsanalyse.

Hvis plasseringen av et bestemt sykdomsgen blir søkt i et bestemt kromosom, vil forskere analysere DNA hos familiemedlemmer med sykdommen, og deretter se etter lignende arvemønstre i RFLP-alleler. Når et sykdomsgen er lokalisert, kan gjennomføring av RFLP-analyse på andre familiemedlemmer avsløre en bærer av mutantgenene eller signalisere generell sykdomsrisiko.

Det er viktig å merke seg at RFLP-teknikken ikke er mye brukt nå, da nyere, mer robuste teknikker brukes til DNA-analyse i rettsmedisin og flere andre felt.

Negativ aspekt av analysen

Dessverre er RFLP analyse teknikken kjedelig og langsom. Bortsett fra å kreve en stor mengde prøve DNA, vil prøven vanligvis være omtrent en kvarts størrelse, noe som er relativt stor for DNA-prøver - prosessen, fra probe merking til vask og autoradiografi, kan ta opp til en hele måneden for å fullføre.

Resultater fra Human Genome Project har ganske mye erstattet behovet for RFLP. Prosjektet ble tillatt for å bestemme hele sekvensen av DNA funnet i humane celler, det menneskelige genom og for å identifisere alle gener i det humane genom.