Betydning av spesifikk aktivitet i proteinisolering

Spesifikk aktivitet er et begrep som brukes til å måle reaksjonshastigheten av et enzym med et substrat.

Spesifikk enzymaktivitet (spesifikk aktivitet for kort) er et mål for enzymrenhet og citeres som enheter / mg . Verdien blir større etter hvert som et enzympreparat blir renere, siden mengden protein (mg) vanligvis er mindre, men reaksjonsraten forblir den samme (eller kan øke på grunn av redusert interferens eller fjerning av inhibitorer).

Spesifikk aktivitet: Måle Enzym Kinetikk

Som en bit av bakgrunn er enzymer proteiner som fungerer som katalysatorer for å redusere mengden aktiveringsenergi for at en reaksjon skal oppstå. Aktiveringsenergi er energien som kreves for å få reaksjoner "startet", siden mange reaksjoner ikke forekommer veldig raskt (eller forekommer i det hele tatt) hvis de er termodynamisk mulige.

Enzymer katalyserer spesifikke reaksjoner på et bestemt sted (kjent som det aktive stedet) hvor reaktantene binder og reagerer for å generere produktene. Substrates har aktive steder som bare er spesifikke for dem, slik at ingen andre stoffer binder eller reagerer på samme sted. Som en lås og nøkkel, vil hvert enzym katalysere bare en bestemt reaksjon (med enkelte unntak).

Spesifikk aktivitet brukes i proteinisolasjonsmetoder for å indikere prosentandelen av rensing. Det er viktig å kjenne denne enheten når du kjøper enzymer for å indikere nøyaktig hvor mye av det rene enzymet du får.

Når man måler enzymkinetikk (reaksjonshastigheten for et enzym med substrat eller overflate), defineres spesifikk aktivitet som mengden substrat enzymet omdanner (reaksjoner katalysert), per mg protein i enzympreparatet per tidsenhet.

Et eksempel på spesifikk aktivitet ville være:

Den spesifikke aktiviteten til det isolerte enzymet ble målt ved 150 umol / min / mg protein før rensing og 800 umol / min / mg etter rensing.

Spesifikk aktivitet er et viktig mål for enzymrenhet. Ulike batcher av et rent enzym bør ha de samme verdiene og til og med å fortynne en enzymløsning mange ganger vil ha identiske spesifikke aktivitetsverdier selv om det vil være forskjellige enzymaktivitetsverdier. Dette skyldes at ved beregning av spesifikk aktivitet, er telleren (enheter / ml) og nevner (mg / ml) påvirket like mye.

Spesifikk aktivitet er svært forskjellig fra aktivitet, men beregningen av spesifikk aktivitet er fortsatt avhengig av aktivitetsverdien. Dette betyr at den angitte spesifikke aktivitetsverdien også vil være avhengig av enzym-enhetsdefinisjonen.

• Batcher av enzymer som har lavere enn forventet spesifikk aktivitetsverdi, kan inneholde enzymmolekyler som har blitt forandret eller blandet med urenheter.

Faktorer som påvirker enzymaktivitet

Det er mulig at ett enzym kan ha forskjellige målte aktivitetsverdier målt i forskjellige laboratorier (det vil si virkelige forskjeller i målt aktivitet, ikke åpenbare forskjeller forårsaket av bruk av forskjellige enhetsdefinisjoner).

Måten en analyse utføres på (testmetoden for å bestemme renheten av enzymer) vil påvirke de rapporterte aktivitetsverdiene. For eksempel er enzymer generelt mer aktive mellom temperaturer på 37 grader Celsius sammenlignet med ved 20 grader Celsius, så hvis en analyse utføres ved 21 grader Celsius, vil verdiene avvike fra analysene utført ved en temperatur på 32 grader Celsius (typisk , analyser utføres ved en temperatur mellom 20-37 grader Celsius).

Således vil definisjonen av enzymenheten bedre uttrykkes som: 1 enhet (U) er mengden enzym som katalyserer reaksjonen av 1 nmol substrat per minutt under standardbetingelser.